Люминесцентная микроскопия

Люминесцентная микроскопия основана на способности многих веществ биологического происхождения и красителей светиться под действием падающего на них света.

Свечение объектов возникает в результате поглощения ими лучистой энергии. Свет люминесценции обладает большей длиной волны, чем поглощенный (правило Стокса). Поэтому люминесценцию выгодно возбуждать либо ультрафиолетовыми лучами, либо сине-фиолетвыми. Возникает люминесценция в цветовой гамме всего или большей части видимого спектра, что дает цветное изображение. Объект, не дающий явления люминесценции, окрашивают специальными красителями - флюорохромами. Люминесценция, свойственная самим микроорганизмам, называется первичной, а после обработки флюорохромами - наведенной или вторичной.

Borrelia burgdorferi. Люминесцентная микроскопия.

В осветителе люминесцентного микроскопа используется мощный источник света (ртутно-кварцевая лампа сверхвысокого давления или галогенная кварцевая лампа), излучающий преимущественно в коротковолновой (ультрафиолетовой, синей) части спектра. Используется система светофильтров: возбуждающие светофильтры пропускают только ту часть спектра, которая возбуждает люминесценцию; теплозащитный светофильтр защищает от перегрева другие светофильтры, препарат и оптику люминесцентного микроскопа.

В медицинской микробиологии применяют два метода люминесцентной микроскопии: флюорохромирование (окрашивание флюорохромами) и флюоресцирующих антител (реакция иммунофлюоресценции - РИФ).

Люминесцентная микроскопия увеличивает контрастность изображения, дает возможность различить отдельные клеточные структуры. Люминесцентная микроскопия применяется для бактериоскопии инфекционных возбудителей, для цитохимического исследования живых и фиксированных микроорганизмов. В РИФ с помощью антител, меченных флюорохромами, выявляются антигены микроорганизмов или антитела в сыворотке больных. РИФ используется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний.